Abstracts Agosto 2010

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Diagnóstico de infecciones intramamarias: evaluación de las opiniones de los expertos sobre la definición de infección intramamaria empleando un análisis conjunto

• Efecto de la infección intramamaria sin sintomatología clínica por Staphylococcus aureus o estafilococos coagulasa negativos durante el primer mes de lactación en el recuento celular y rendimiento lechero en terneras

• Valoración del recuento celular somático a nivel del cuarterón o de la vaca en ordeño

• Efecto de la terapia de la vaca seca y del sellador interno de pezones en infecciones intramamarias durante la subsiguiente lactación

Las actitudes y empatía de los ganaderos de vacuno de leche hacia los animales están asociadas con los indicadores de bienestar animal

• Resistencia antimicrobiana de Staphylococcus aureus aislados en casos de mastitis bovina en China

Variación en los indicadores de mastitis a nivel de rebaño entre primíparas y multíparas en rebaños lecheros alemanes

El manejo de la ingestión de energía en la dieta de preparto afecta a la ingesta en el posparto y al rendimiento de la lactación en vacas Holstein primíparas y multíparas

Fingerprinting (GTG)(5)-PCR para la clasificación e identificación de especies Staphylococcus coagulasa negativos de leche bovina y ápices del pezón: Comparación de tipos de variedades y aislados de campo

• Posible papel de la infección con herpesvirus bovino tipo 4 en la infertilidad de la vaca

Diagnóstico de infecciones intramamarias: evaluación de las opiniones de los expertos sobre la definición de infección intramamaria empleando un análisis conjunto

Diagnosing intramammary infections: Evaluating expert opinions on the definition of intramammary infection using conjoint analysis

S. Andersen*, I.R. Dohoo*, R. Olde Riekerink†, H. Stryhn*,
Journal of Dairy Science. Volume 93, Issue 7, Pages  2966-2975 (July 2010)

El principal objetivo de este estudio fue desarrollar un conjunto de criterios que sirvieran de pseudocriterio de referencia para definir lo que es una infección intramamaria utilizando datos de 3 muestras de leche de cuarterón consecutivas extraídas con una semana de diferencia.

Se utilizaron datos de vacas en lactación de 90 rebaños lecheros de 4 provincias canadienses para generar los conjuntos de datos (perfiles) utilizados en el análisis conjunto para conseguir opiniones de los expertos sobre el tema. Los expertos fueron escogidos de entre los participantes (n=23) en la Mastitis Research Workers’Conference de 2007 de Minneapolis y de una serie de cursos de laboratorio sobre mamitis destinados a veterinarios (n=25) de los Países Bajos. Se escogieron perfiles de cuarterones de ubre de tres semanas con combinaciones concretas de recuento de células somáticas, especies bacterianas aisladas y recuento de colonias en placa, y se incluyeron en el análisis de conjunto basado en el deseo de lograr distribuciones homogéneas en las categorías de 6 variables construidas.

Se presentaron a los participantes 3 conjuntos de 20 tarjetas. En cada tarjeta se les pedía que asignaran una probabilidad de infección el día intermedio (día de la prueba) en el perfil de tres semanas. En función del conjunto de tarjetas, se les pidió que respondieran sólo a la probabilidad de infección con estafilococos coagulasa-negativos, Escherichia coli, o Staphylococcus aureus. Estos tres microorganismos se escogieron por representar un patógeno menor, un patógeno ambiental mayor y un patógeno contagioso mayor, respectivamente. Las probabilidades asignadas a cada microorganismo se tabularon en función del número de veces que el microorganismo en cuestión fue aislado en el periodo de 3 semanas, de cuántas colonias del microorganismo en cuestión fue aislado el día de la prueba, y del recuento de células somáticas (≤ o >200,000 células/mL).

Hubo una considerable variación entre las probabilidades asignadas a cada una de las combinaciones de factores. Se computaron la mediana, el mínimo y el máximo de las probabilidades signadas para cada combinación. Las combinaciones con una probabilidad mediana de > 50% fueron consideradas positivas a infección intramamaria e incluidas como criterio en la norma consensuada. Ello dio lugar a 4 posibles criterios, que se condensaron en los siguientes 2 por consenso en la Mastitis Research Workers’ Conference de 2008 de Toronto: 1) el microorganismo en cuestión fue aislado el día de la prueba con al menos 10 colonias (1.000 ufc/ml), y 2) el microorganismo en cuestión fue aislado al menos dos veces en el periodo de 3 semanas.

Efecto de la infección intramamaria sin sintomatología clínica por Staphylococcus aureus o estafilococos coagulasa negativos durante el primer mes de lactación en el recuento celular y rendimiento lechero en terneras

Effect of nonclinical Staphylococcus aureus or coagulase-negative staphylococci intramammary infection during the first month of lactation on somatic cell count and milk yield in heifers

M.-È. Paradis, É. Bouchard, D.T. Scholl, F. Miglior, J.-P. Roy
Journal of Dairy Science Volume 93, Issue 7, Pages  2989-2997  (July 2010)

Los estafilococos coagulasa negativos (CNS) constituyen la causa más prevalente de infecciones intramamarias en novillas alrededor del parto, pero Staphylococcus aureus no debe ignorarse, puesto que también es prevalente y contagioso, y presenta una mayor probabilidad de persistir una vez iniciada la lactación. El objetivo de este estudio fue determinar el efecto de una infección subclínica causada por S. aureus o CNS diagnosticada durante el primer mes de lactación en novillas en el SCC, la producción de leche y el riesgo de desvieje durante toda la primera lactación.

Los datos se obtuvieron de una cohorte de 50 explotaciones en las que se seguía un programa de seguimiento y control de las mamitis y adheridas al sistema de registro de sanidad animal (DS@HR) mediante la clínica ambulatoria de la Faculté de médecine vétérinaire de la Universidad de Montreal (St-Hyacinthe, Québec, Canadá). Este programa incluía sistemáticamente la recogida de muestras de leche compuestas en cada visita a las explotaciones de novillas que hubieran parido recientemente. Se examinó un total de 2.273 novillas Holstein.

De entre las 1.691 novillas que cumplían todos los criterios de selección, a 90 (5%) se les diagnosticó S. aureus, a 168 (10%) se les diagnosticó CNS, y 153 (9%) fueron negativas (no se aisló ningún patógeno). El logaritmo natural del recuento de células somáticas (lnSCC) del día de la prueba fue modelado en un modelo de regresión lineal de mediciones repetidas con el rebaño como efecto aleatorio. Los ln SCC medios ajustados según el modelo de los grupos S. aureus y CNS fueron significativamente más elevados que en el grupo de cultivo negativo entre los días 40 y 300 de lactación. Al mejor nivel de día de la prueba, los ln SCC de los grupos S. aureus y CNS fueron de media 1,2 y 0,6 veces más elevados, respectivamente, que el del grupo de cultivo negativo. Un modelo similar para producción de leche puso de manifiesto que la producción media de leche no era estadísticamente distinta entre los grupos cultivo entre los días 40 y 300 de lactación.

La presencia de infecciones intramamarias por S. aureus o CNS durante el primer mes de lactación en novillas se correlaciona con un futuro aumento del SCC a lo largo de toda la primera lactación.

Valoración del recuento celular somático a nivel del cuarterón o de la vaca en ordeño

Somatic cell count assessment at the quarter or cow milking level

H. Mollenhorst, P.P.J. van der Tol, H. Hogeveen
Journal of Dairy Science.Volume 93, Issue 7, Pages  3358-3364  (July 2010)

El objetivo fue averiguar si la valoración en línea del recuento de células somáticas (SCC), combinado con la conductividad eléctrica (EC), debe implementarse a nivel del cuarterón o de la vaca en ordeño.

Se recogieron datos de tres explotaciones con sistemas de ordeño automáticos, de tal forma que se dispuso de 3.191 ordeños de cuarterones que se utilizaron en los análisis. Se utilizaron observaciones visuales de la primera leche y de muestras de leche de cuarterón para el análisis del SCC en el laboratorio, con el fin de definir 2 criterios de referencia. Uno se basó en la mera observación visual y el otro se basó en una combinación de observación visual y SCC (utilizando un valor de referencia de 500.000 células/ml), lo cual significó que un ordeño de cuarterón debía tener leche visualmente anómala y un aumento del SCC para considerarse positivo. Durante la primera parte del ordeño tuvo lugar la valoración en línea del SCC a nivel del cuarterón. Se utilizaron muestras compuestas de leche de la vaca en ordeño para el análisis del SCC en laboratorio y para comparar el resultado de la valoración del SCC a nivel del cuarterón y de la vaca. La EC a nivel del cuarterón fue medida mediante sensores en línea del sistema de ordeño automático.

Se calcularon alertas para indicadores de SCC en base a valores de referencia directos. Las alertas para la EC se basaron en valores de referencia directos, o en cocientes entre cuarterones. Los segundos se calcularon dividiendo el valor de un cuarterón dado por el valor medio de los 2 cuarterones más bajos de dicho ordeño. Los indicadores de EC y de SCC se combinaron con una función booleana “y” u “o”. Se utilizaron curvas características de funcionamiento del receptor para presentar visualmente resultados utilizando distintos valores umbral. Se utilizaron la sensibilidad, la especificidad y el porcentaje de éxito a nivel del cuarterón y la tasa de falsa alarma por cada 1.000 ordeños de vacas para comparar los indicadores a determinados niveles de sensibilidad o especificidad.

La valoración del SCC a nivel del cuarterón fue superior a la valoración a nivel de la vaca (área bajo la curva parcial transformada = 0,70 frente a 0,62) al combinarla con la medición de la EC a nivel del cuarterón. Cuando se buscaba el mismo nivel de sensibilidad (por ejemplo, del 50%) con una observación de leche anómala como criterio de referencia, se generaron más falsas alarmas con la valoración a nivel de la vaca (137 por cada 1.000 ordeños de vacas) que con la valoración del SCC a nivel del cuarterón (75 por cada 1.000 ordeños de vacas). En comparación, utilizando sólo la EC se observaron 292 falsas alarmas por cada 1.000 ordeños de vacas en la misma situación.

Por tanto, se concluyó que la valoración del SCC a nivel del cuarterón era superior a la valoración a nivel de la vaca cuando se combinaba con la valoración de la EC a nivel del cuarterón.

Efecto de la terapia de la vaca seca y del sellador interno de pezones en infecciones intramamarias durante la subsiguiente lactación

The effect of dry cow therapy and internal teat-sealant on intra-mammary infections during subsequent lactation.

Bhutto AL, Murray RD, Woldehiwet Z.
Research in Veterinary Science. 2010 Jun 30.

La terapia de la vaca seca (DCT), una infusión de antibióticos en el interior de la glándula mamaria al final de la lactación, se utiliza mucho para el control de infecciones intramamarias (IIM) en la vaca en lactación. No obstante, la preocupación del consumidor cada vez más importante acerca del uso de antibióticos ha dado lugar a la búsqueda de alternativas al uso sistemático de antibióticos durante el secado.

En este estudio se estudiaron los efectos de tres tratamientos de vaca seca, dos tipos de DCT y un sellador interno de pezón, en el desarrollo de nuevas IIM y mamitis clínicas con 240 vacas pertenecientes a dos rebaños (Rebaño A y Rebaño B). En el Rebaño A, se trató a 60 vacas con un tipo de DCT (Cloxacilina) y a las otras 60 con otro tipo de DCT (Framicetina). En el Rebaño B, se trató a 60 vacas con un sellador interno de pezón y al otro rebaño no se le administró ningún tratamiento.

Hubo una cantidad significativamente superior de nuevas IIM en el momento del parto en las vacas control que en las tratadas con selladores internos de pezón (p < 0,001) y hubo más casos de mamitis clínica en el grupo control. El número de casos clínicos detectados en vacas tratadas con sellador interno de pezón en el Rebaño B no fue significativamente diferente del de los detectados en vacas del Rebaño A tratadas con Cloxacilina o Framicetina.

Las actitudes y empatía de los ganaderos de vacuno de leche hacia los animales están asociadas con los indicadores de bienestar animal

Dairy farmer attitudes and empathy toward animals are associated with animal welfare indicators

C. Kielland*, E. Skjerve†, O. Østerås*, A.J. Zanella*‡
Journal of Dairy Science. Volume 93, Issue 7, Pages  2998-3006 (July 2010)

Las actitudes y la empatía de los ganaderos influyen en la interacción hombre-animal, y por tanto afectan a la conducta hacia los animales. El objetivo fue investigar cómo las medidas de actitud y empatía hacia los animales se asocian a indicadores de bienestar animal, como la producción de leche, la incidencia de mamitis, el índice de fertilidad y la prevalencia de lesiones cutáneas en las vacas.

Para valorar la empatía hacia los animales, se desarrolló un instrumento de evaluación del dolor basado en fotografías de distintos trastornos que podrían asociarse a cierto grado de dolor en el ganado vacuno y que incluían preguntas destinadas a valorar las actitudes hacia los animales. Las fotos de trastornos dolorosos son útiles para obtener respuestas empáticas medibles al dolor en el ser humano.

Se trabajó con un total de 221 ganaderos escogidos mediante e-mail y se obtuvieron 154 respuestas. En el primer análisis, los ganaderos se clasificaron en dos grupos en función de si estaban o no de acuerdo con la afirmación de que “los animales experimentan dolor físico igual que el ser humano”. En el segundo análisis, los ganaderos fueron asignados a una puntuación mediana de valoración del dolor obtenida de sus estimaciones en la escala analógica visual de 21 trastornos que se consideran dolorosos para el ganado vacuno. En el tercer análisis, los ganaderos fueron clasificados en 3 grupos en función de sus respuestas en la escala analógica visual. Tres de los trastornos se consideraron los más dolorosos: fractura de la tuberosidad coxal, distocia y mamitis grave.

Los ganaderos con actitudes positivas hacia los animales puntuaron dos puntos más en la escala de empatía que los ganaderos con actitudes negativas. La experiencia personal con cada trastorno adicional dio lugar a una puntuación 0,09 puntos superior. El análisis de grupo puso de manifiesto 3 grupos. Los ganaderos del grupo 3 presentaban la mediana de valoración del dolor más elevada (6.7±0.2), lo cual indicó un elevado nivel de empatía y una actitud positiva hacia los animales. Presentaron la menor prevalencia de lesiones en el carpo (24±6%) y la mayor producción de leche (6,705±202kg).

Las complejas asociaciones entre indicadores de empatía y actitudes con resultados de bienestar relevantes sugieren que la realización de estudios sobre las actitudes y la empatía en las interacciones entre ser humano y animales podrían servir para procurar instalaciones adecuadas para salvaguardar el bienestar de los animales.

Resistencia antimicrobiana de Staphylococcus aureus aislados en casos de mastitis bovina en China

Antimicrobial Resistance of Staphylococcus Aureus Isolated From Bovine Mastitis in China.

Shi D, Hao Y, Zhang A, Wulan B, Fan X.
Transboundary and Emerging Diseases. 2010 Jun 15.

La mamitis constituye uno de los principales problemas de la producción en la industria lechera de todo el mundo. La mamitis causada por Staphylococcus aureus es un gran problema para la industria lechera debido a su resistencia al tratamiento con antibióticos. En este informe se presentan los resultados de una prueba de sensibilidad a antibióticos llevada a cabo en 236 Staphylococcus aureus aislados de muestras de leche que fueron recogidas de casos de mamitis en rebaños de vacas de China.

Las regiones y número de aislados son los siguientes: Inner Mongolia (112), Hebei (58) y Heilongjiang (66). Se determinó la sensibilidad a la ampicilina, la penicilina G, la amoxicilina, la piperacilina, la cefalexina, la cefazolina, la cefotaxima, la ceftazidima, la cefoxitina, la SMZ-TMP, la gentamicina, la kanamicina, la norfloxacina, la ciprofloxacina, la ofloxacina, la furaxona, la torlamicina, la roxitromicina, la clindamicina y la vancomicina mediante la técnica de la difusión de disco.

La prueba de sensibilidad a antibióticos mostró que un 87,30% (206 de 236) de los aislados era resistente a la penicilina G. Este resultado se comparó con los informes de otros países: el nivel general de resistencia fue globalmente alto para todos los antimicrobianos probados.

Variación en los indicadores de mastitis a nivel de rebaño entre primíparas y multíparas en rebaños lecheros alemanes

Variation in herd level mastitis indicators between primi- and multiparae in Dutch dairy herds.

van den Borne BH, van Schaik G, Lam TJ, Nielen M.
Preventive Veterinary Medicine. 2010 Jun 10.

Se utilizaron datos de recuento de células somáticas de muestras compuestas procedentes del registro nacional del día de la prueba y de casos de mamitis clínicas diagnosticadas por ganaderos para estimar la aparición de mamitis, entre julio de 2004 y junio de 2005, en vacas primíparas y multíparas de los Países Bajos.

Los rebaños tuvieron que participar en el registro del día de la prueba y tenían que tener al menos 50 vacas. Una selección aleatoria de 396 de estos rebaños lecheros aportó datos sobre el recuento de células somáticas de muestras compuestas, mientras que 205 rebaños aportaron también información sobre casos de mamitis clínicas. Se calculó la prevalencia de las mamitis subclínicas por rebaño como la proporción de vacas con un recuento de células somáticas > 200.000 células/ml. La incidencia de mamitis clínicas se calculó como el número de casos de mamitis clínicas dividido por el número de vacas-días en riesgo por rebaño. Se utilizaron modelos binomiales negativos par corregir para la sobredispersión.

La prevalencia media de mamitis subclínica a nivel del rebaño fue del 12,8% (IC del 95%: 12,2-13,5%) en primíparas y del 27,1% (IC del 95%: 26,2-28,1%) en multíparas. Se observaron casos de mamitis clínica a nivel del rebaño una media de 20,2 (IC del 95%: 18,3-22,4) y 39,6 (IC del 95%: 37,1-42,3) veces por cada 100 vacas-años en riesgo, respectivamente. Algunos rebaños presentaron una elevada cantidad de mamitis en un grupo de número de parto, mientras que fue baja en el otro.

Es necesario realizar un seguimiento en función del número de parto para identificar este tipo de rebaños.

El manejo de la ingestión de energía en la dieta de preparto afecta a la ingesta en el posparto y al rendimiento de la lactación en vacas Holstein primíparas y multíparas

Prepartum dietary management of energy intake affects postpartum intake and lactation performance by primiparous and multiparous Holstein cows

N.A. Janovick, J.K. Drackley
Journal of Dairy Science. Volume 93, Issue 7, Pages  3086-3102  (July 2010)

Se llevó a cabo una prueba para determinar el efecto del plano de ingestión de energía preparto en el rendimiento post-parto.

Se asignaron vacas Holstein primíparas (n=24) y multíparas (n=23) aleatoriamente a partir de la fecha prevista de parto a 1 de 3 niveles de ingestión de energía preparto. Se les proporcionó un alimento de contenido energético moderado [1,63 Mcal de energía neta para lactación (ENL)/kg; 15% de proteína bruta (PB)] ad limitum (OVR) o bien con restricción (RES) para aportar un 150% o un 80% de las necesidades energéticas establecidas por el Nacional Research Council (2001), respectivamente, para vacas secas en la última fase de la gestación. Para reducir la ingestión de energía al 100% de las necesidades del NRC y la ingestión de materia seca ad limitum (DMI), se incluyó paja de trigo troceada a razón de un 31,8% de la materia seca (MS) en un alimento control (CON; 1.21 Mcal de ENL/kg de MS; 14% CP).

Las vacas multíparas y primíparas asignadas a OVR ganaron condición corporal durante el periodo seco [puntuación inicial de condición corporal (BCS)=3,3], pero no presentaron una condición corporal excesiva en el momento del parto (BCS = 3,5). Las vacas multíparas del grupo OVR perdieron más BCS postparto que las multíparas de los grupos RES o CON. Las vacas primíparas perdieron cantidades similares de BCS entre los grupos de tratamiento nutricional postparto. El hecho de añadir paja de trigo troceada a los alimentos CON previno un gran descenso de la DMI preparto tanto en vacas primíparas como en multíparas. Durante las primeras 3 semanas postparto, la DMI como porcentaje del peso corporal fue menor en vacas multíparas del grupo OVR que en vacas multíparas del grupo RES. Los efectos de la alimentación preparto no se mantuvieron a lo largo de todo el periodo de lactación de 8 semanas. Dada la mayor movilización de reservas corporales, las vacas OVR presentaron mayor porcentaje de grasa en la leche y mayor producción de leche corregida para grasa al 3,5% durante las primeras 3 semanas postparto. Las vacas multíparas asignadas al grupo OVR experimentaron una disminución del 55% en el balance energético y las vacas primíparas una disminución del 40% en el balance energético durante las 3 últimas semanas preparto, respecto a las vacas CON o RES, que presentaron menos cambios. Las vacas multíparas alimentadas con OVR presentaron una mayor contribución de energía de las reservas energéticas del organismo a la producción de energía de la leche que las vacas CON o RES.

Un exceso de energía en el alimento durante el preparto dio lugar a grandes cambios en el balance energético periparto. Incluso en ausencia de exceso de condición corporal, un gran cambio en la DMI y en el balance de energía preparto influyó en la DMI y en la pérdida de BCS postparto, sobre todo en vacas multíparas. La paja de trigo troceada fue eficaz para controlar la ingestión de energía preparto, aunque las vacas primíparas no lograron la DMI prevista. Incluso así, el control o restricción de la ingestión de energía en vacas primíparas no fue perjudicial para el rendimiento de la lactación durante las primeras 8 semanas de lactación.

Fingerprinting (GTG)(5)-PCR para la clasificación e identificación de especies Staphylococcus coagulasa negativos de leche bovina y ápices del pezón: Comparación de tipos de variedades y aislados de campo

(GTG)(5)-PCR fingerprinting for the classification and identification of coagulase-negative Staphylococcus species from bovine milk and teat apices: A comparison of type strains and field isolates.

Braem G, De Vliegher S, Supré K, Haesebrouck F, Leroy F, De Vuyst L.
Veterinary Microbiology. 2010 Jun 9.

Debido a las importantes pérdidas económicas de la industria de las explotaciones lecheras causadas por las mamitis y a la posible influencia de los estafilococos coagulasa negativos (CNS) en el desarrollo de esta enfermedad, se precisan métodos de identificación precisa que aclaren cuáles son las distintas especies del variado grupo de los CNS.

En este estudio se sometieron 39 cepas tipo Staphylococcus y 253 aislados de campo a identificación genética mediante (GTG)(5)-PCR para construir un esquema de referencia para la clasificación e identificación de distintos CNS de muestras de leche (sub)clínicas y de ápices de pezón. La validación del sistema de referencia tuvo lugar mediante división de los aislados de campo en dos grupos y comprobando si un grupo de aislados de campo, junto con cepas tipo, podría ser utilizado para una correcta clasificación e identificación de un segundo grupo de aislados de campo.

La identificación genética mediante (GTG)(5)-PCR logró una capacidad de tipificación del 94,7% y una exactitud del 94,3% respecto a identificaciones basadas en la secuencia génica.

El estudio pone de manifiesto la utilidad del método para determinar la identidad de especies de Staphylococcus bovinas si se dispone de un referente de identificación actualizado con aislados de campo.

Posible papel de la infección con herpesvirus bovino tipo 4 en la infertilidad de la vaca

The possible role of bovine herpesvirus type-4 infection in cow infertility.

Gür S, Do?an N.
Animal Science Journal. 2010 Jun;81(3):304-8.

Los estudios experimentales y de campo han demostrado que la infección por herpesvirus bovino tipo 4 (BHV-4) conlleva distintos problemas en el sistema reproductor. En este estudio se estudió serológicamente cómo interviene la infección por BHV-4 en la repetición de la inseminación.

Se extrajeron 84 muestras de vacas a las que se había diagnosticado necesidad de repetir la inseminación en dos rebaños lecheros organizados; se muestreó un mismo número de vacas sanas de cada explotación. El resto de muestras (105) se extrajo de vacas reproductivamente normales que se reproducían en 18 pequeñas empresas como grupo control. Se observó que la proporción de seropositividad en las vacas en las que se estableció necesidad de repetir la inseminación era significativamente más alta (69% (58/84)) que en las otras vacas (44% (37/84)) en las mismas explotaciones.

Se observó que el valor más bajo de positividad a anticuerpos frente a BHV-4 era del 24,7% (26/105) en las muestras de explotaciones familiares. Se calculó una odds ratio (OR) de 2.834 en vacas con un diagnóstico de necesidad de repetir la inseminación respecto a las vacas sanas de las mismas explotaciones, mientras que fue de 6.778 en vacas con y sin problemas reproductivos de explotaciones organizadas en comparación con explotaciones pequeñas.

Por ello, la infección por BHV-4 puede considerarse uno de los motivos de repetición de la inseminación, además de otros trastornos reproductivos.

 


© Boehringer Ingelheim España, S.A. Div. Veterinaria Modificado el: 26-Jul-2010