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Epidemiología molecular y estructura de la población de la especie bovina Streptococcus uberis
Molecular epidemiology and population structure of bovine Streptococcus uberis
M. G. Rato, R. Bexiga, S. F. Nunes, L. M. Cavaco, C. L. Vilela and I. Santos-Sanches
J. Dairy Sci. 2008. Vol. 91: 4542-4551
En el trabajo, que se describe a continuación, se pretende caracterizar la epidemiología y estructura poblacional de 30 cepas de Streptococcus uberis, causantes de mamitis subclínicas en 6 rebaños lecheros portugueses. Para alcanzar este objetivo, se aplicaron técnicas de electroforesis en gel con campo pulsátil (para agrupar las cepas) y el tipado de secuencias multilocus (para valorar la relación entre los diferentes patrones electroforéticos e identificar los linajes geneticos).
Como resultado, se obtuvieron 18 patrones electroforéticos, tres de los cuales reunían a prácticamente la mitad de las cepas analizadas (46,4%). Estos tres grupos bacterianos principales eran específicos de rebaño, lo que sugería, bien una transmisión individuo a individuo o la infección a partir de cepas procedentes de los mismos reservorios ambientales. Los patrones electroforéticos restantes procedían de diferentes rebaños, lo que sugiere que el origen de las infecciones por S. uberis podría ser el ambiente.
Por otra parte, el análisis de las secuencias multilocus de las 30 cepas permitió establecer 14 tipos de secuencias, nuevas todas ellas, por una parte, con 10 nuevos alelos para genes housekeeping, es decir, imprescindibles para el funcionamiento celular y por otra, con alelos ya conocidos pero combinados de diferente manera. Cinco de estos tipos de secuencias se agruparon en 3 complejos clonales (linajes): ST-143, ST-86, y ST-5, que incluyen cepas bovinas de S. uberis de diferentes áreas geográficas (Australia, Nueva Zelanda, Reino Unido, Suecia y Dinamarca), y 9 clones celulares simples.
Este trabajo aporta información novedosa en relación al origen genético de diferentes cepas del patógeno S. uberis causantes de mamitis en el ganado lechero portugués.
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Detección de mamitis clínica con una cámara térmica
Detection of clinical mastitis with the help of a thermal camera
M. Hovinen, J. Siivonen, S. Taponen, L. Hänninen, M. Pastell, A.-M. Aisla and S. Pyörälä
J. Dairy Sci. 2008. Vol. 91: 4592-459
El incremento en el tamaño de las explotaciones lecheras hace necesarios nuevos métodos que permitan controlar la salud de los animales con una menor inversión de tiempo. Por esta razón, el objetivo de este trabajo fue conocer la capacidad de una cámara térmica para detectar la mamitis clínica.
Para realizar este estudio se infectaron experimentalmente 6 vacas mediante la infusión intramamaria (en los cuarterones delanteros izquierdos) del lipopolisacárido de la bacteria Escherichia coli. Los cuarterones restantes se utilizaron como controles. Durante los 5 días de estudio, antes de los ordeños matutino y vespertino, se examinaron visualmente los animales para detectar cambios, locales y generales provocados por la infección; además, se tomaron muestras para determinar la presencia de indicadores de la inflamación e imágenes térmicas de los ángulos medial y lateral de las ubres.
Los primeros signos detectados (a las 2 horas posinfección) fueron cambios en el estado general del animal y síntomas locales en el cuarterón afectado. A las 4 horas, se incrementaron la temperatura rectal, los recuentos de células somáticas en leche y la conductividad eléctrica. Finalmente, a las 8 horas, se incrementó la actividad de la enzima N-acetil--D-glucosaminidasa. La cámara térmica detectó con éxito cambios de temperatura de 1 a 1,5 ºC en la piel de la ubre, asociados a la mamitis clínica, no obstante, los signos clínicos locales se manifestaron antes que los incrementos de temperatura corporal y de la piel.
En razón de los resultados obtenidos, los autores concluyen que la ubre manifiesta rápidamente cambios asociados a enfermedades, lo cual la hace indicada para detectar cualquier proceso febril mediante métodos no invasivos, y proponen la instalación de cámaras térmicas en las salas de ordeño o en la proximidad de los comederos para hacer posible la detección de cambios de temperatura asociados a mamitis clínicas u otros procesos patológicos que afectan al ganado lechero.
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Utilización de detergentes domésticos en el test de California
Use of domestic detergents in the California mastitis test for high somatic cell counts in milk
K. A. Leach, M. J. Green, J. E. Breen, J. N. Huxley, R. Macaulay, H. T. Newton, and A. J. Bradley, MA
The Veterinary Record, 2008. Vol. 163: 566-570
En el estudio que se detalla a continuación se comparó la idoneidad de cuatro detergentes comerciales con el reactivo utilizado en el test de California, para detectar muestras de leche con recuentos de células somáticas que superan las 200.000 cél./ml; además, se determinaron las diferencias de interpretación entre las diferentes personas que realizaron los análisis.
Se obtuvieron variaciones de la sensibilidad y especificidad de la prueba según el detergente utilizado o la persona que realizó la prueba. Cuando ésta era realizada por el operario más experimentado el producto Fairy Liquid, diluido convenientemente, conseguía resultados prácticamente idénticos a los obtenidos por el reactivo específico del test de California. En este sentido, las sensibilidades medias obtenidas por los ocho operarios para detectar un nivel de recuentos de 200.000 células/ml fueron: del 82% para el detergente Fairy Liquid y del 84% para el reactivo específico del test. En cuanto a la especificidad obtenida en la prueba fue, respectivamente, 93 y 91%.
En lo que respecta a los tres detergentes restantes, con menor cantidad de surfactantes aniónicos, sus sensibilidades fueron inferiores, aunque con especificidades similares.
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Utilización de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para diagnosticar Streptococcus agalactiae
Using polymerase chain reaction techniques in the diagnosis of Streptococcus agalactiae
P. Mansell, R. Agnew, G. Browing
Proceedings del 25º Congreso Mundial de Buiatría, Budapest (Hungría)
El objetivo de este trabajo, era desarrollar una técnica de PCR apta para identificar Streptococcus agalactiae en muestras de leche. Una técnica como ésta supondría una mejora en la identificación de esta bacteria con respecto al cultivo bacteriano o los métodos genotípicos, puesto que la PCR ofrece mayor rapidez, sensibilidad y otras ventajas técnicas.
Las muestras para realizar el estudio procedían de 26 rebaños australianos con problemas recientes de incrementos en los recuentos de células somáticas o procesos, clínicos o subclínicos, de mamitis. Las muestras de tanque o individuales se incubaron en caldo de Todd Hewitt durante toda la noche y posteriormente se procesaron para extraer el ADN que se amplificó mediante PCR con primers específicos para S. agalactiae.
Los resultados mostraron que 9 de las 24 muestras de tanque eran positivas al patógeno. Por otra parte, de los 7 rebaños de los que se disponían muestras del tanque e individuales, sólo en un caso se observaron discrepancias entre los resultados de las muestras individuales y el tanque.
A partir de los resultados, los autores afirman que la prevalencia de S. agalactiae es más elevada de lo que se cree actualmente, y por lo tanto, todavía se le puede considerar como un patógeno clave en la presentación de mamitis. En cuanto al método de identificación, los autores concluyen que técnicas como la PCR podrían utilizarse para controlar la presencia de S. agalactiae en los rebaños a partir de muestras procedentes del tanque de leche, ya que permiten detectar de forma temprana los rebaños con riesgo de presentar recuentos elevados de células somáticas.
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La detección automática de mamitis clínica se mejora mediante la monitorización en línea de los recuentos de células somáticas
Automatic detection of clinical mastitis is improved by in-line monitoring of somatic cell count
C. Kamphuis, R. Sherlock, J. Jago, G. Mein and H. Hogeveen
J. Dairy Sci. 2008. Vol. 91:4560-4570
El objetivo de este trabajo era conocer si la determinación “en línea” (mientras se realiza el ordeño) de los recuentos de células somáticas podría utilizarse como único criterio o en combinación con la determinación de la conductividad de la leche de un cuarterón para detectar las mamitis clínicas durante el ordeño.
Los datos para realizar el estudio se obtuvieron de un rebaño de 200 vacas al que se realizaba ordeño automático. Diariamente, se tomaban muestras para realizar los recuentos de células somáticas, que mensualmente se contrastaban con resultados laboratoriales, y para determinar la conductividad eléctrica de la leche. Las infecciones intramamarias confirmadas se utilizaban como casos positivos de referencia para comparar los distintos métodos de detección de mamitis estudiados.
Los umbrales de detección se ajustaron para conseguir un 80% de sensibilidad en las tres alternativas: recuento de células en línea exclusivamente, determinación de la conductividad eléctrica y combinación de ambos métodos. El índice de éxito (también conocido como valor predictivo positivo) y el índice de falsos positivos (número de falsos positivos por 1.000 ordeños) se utilizaron para evaluar su precisión.
Los recuentos de células somáticas, realizados en línea, estaban considerablemente correlacionados con los resultados obtenidos en el laboratorio (r=0,82) cuando los valores eran mayores de 200x103 cél./ml. Este valor resultó ser más preciso al mostrar un índice de éxito superior al obtenido con la conductividad (12,7-15,9% frente a 6,9-11,0%) y un índice de falsos negativos menor (2,9-3,7 frente a 4,7-7,8). No obstante, la combinación de los dos procedimientos multiplicó por 2 o 3 veces el índice de éxito (21,9-32,0%) y redujo en la misma proporción el índice de falsos negativos (1,2-2,1).
Con los resultados obtenidos, los autores concluyen que la detección de la mamitis clínica mejoró cuando la determinación de la conductividad eléctrica de la leche se complementó con los recuentos en línea de las células somáticas.
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¿El comportamiento de las vacas con cojera en el cubículo está condicionado por su diseño?
Comfort zone-design free stalls: do they influence the stall use behavior of lame cows?
N. B. Cook1, M. J. Marin, R. L. Mentink, T. B. Bennett and M. J. Schaefer
J. Dairy Sci. 2008. 91:4673-4678
En este trabajo se estudió, durante 48 horas, el comportamiento de 59 vacas ubicadas en 4 explotaciones con cubículos libres con zona de confort y diseñados para vacas maduras Holstein de 700 kg.
Las vacas se clasificaron según su nivel de cojera: sanas, con cojera leve y con cojera moderada, y se comparó su comportamiento en los diferentes tipos de cama disponibles en los cubículos: en dos explotaciones tenían colchonetas de hule picado con una capa de viruta de madera, y en las otras dos, Pack Mat (colchonetas porosas de hule picado, cuya área posterior se sitúa 5 cm por debajo del bordillo y se cubren hasta dicho bordillo con 5-8 cm de arena).
A pesar de disponer de cubículos más espaciosos, las vacas cojas permanecieron ellos en pie 2 horas más que las vacas sin cojera. Aunque se observó un incremento significativo de la permanencia en los cubículos con Pack Mat para las vacas cojas, el tiempo medio que permanecieron levantadas (0,95% intervalo de confianza) fue solo 0,7 (0-3,0) h/día para las vacas sanas y 1,6 (0-4,2) h/día para los animales con cojera moderada. Resultados inferiores a los observados en otros tipos de colchoneta: 2,1 (0,0-4,0), 4,3 (1,6-6,9) y 4,9 (2,5-7,3) h/día de permanencia en pie para vacas sanas, levemente cojas y moderadamente cojas, respectivamente.
Las observaciones realizadas apoyan la hipótesis de que el tipo de cama determina el comportamiento y permanencia de los animales en el cubículo y no otros elementos de diseño. El hecho de que la colchoneta esté cubierta por tan sólo 5 a 8 cm de arena ofrece los beneficios de las camas de arena con un mayor confort para los animales y las ventajas de un mantenimiento del cubículo más sencillo, lo que supone una alternativa de gran utilidad para los ganaderos.
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Muestras para bacteriología utilizadas en la selección genética frente a la mamitis clínica
The use of data from sampling for bacteriology for genetic selection against clinical mastitis
W. Ouweltjes, J. J. Windig, G. de Jong, T. J. G. M. Lam, J. ten Napel and Y. de Haas
J. Dairy Sci. 2008. Vol. 91: 4860-4870
Para mejorar la resistencia genética de los animales a la mamitis clínica, los criadores de vacuno lechero daneses están buscando alternativas que les permitan determinar con mayor precisión ciertos valores reproductivos. Por esta razón, el objetivo de este trabajo fue investigar si los resultados bacteriológicos de las muestras de leche podrían informar acerca de la presentación de mamitis, destinarse a reproducción, y en caso de ser posible cómo utilizar dichos datos.
Si bien hay dos flujos diferentes de muestras para bacteriología en los Países Bajos, no se creyó necesario tener en cuenta el origen de las muestras. En ambos casos, la mayor parte de dichas muestras tenían un aspecto normal, así que la información procedente de estos datos se combinó con análisis genéticos.
Aproximadamente, dos tercios de los datos de bacteriología podían relacionarse con los registros lecheros y de pedigrí. Relativamente pocos ganaderos (<3%) tomaron 5 o más muestras para bacteriología en un plazo de 3 años. Sus rebaños tenían mayores producciones de leche y menores recuentos de células somáticas que otros rebaños en los que no se tomaban muestras. Sin embargo, el rango y la variación de estas variables entre los dos tipos de manejo del rebaño eran similares y se daba un solapamiento de los sementales utilizados en estos grupos.
Que las muestras fueran utilizadas o no para bacteriología resultó ser un indicador potencial de mamitis clínica para cada individuo, porque este rasgo tenía una importante correlación genética con las mamitis clínicas registradas por los ganaderos (0,84 o 0,89, en función del grupo de datos) y una heredabilidad (2%) y variación genética similar. Las correlaciones genéticas entre los resultados bacteriológicos y los recuentos de células somáticas también fueron similares a los registrados para las mamitis clínicas por los ganaderos.
Los autores consideran que la gran ventaja de estos datos bacteriológicos es que se toman de forma rutinaria y son almacenados en una base de datos central, lo que no ocurre para los casos clínicos de mamitis, de manera que los resultados obtenidos en los cultivos bacteriológicos pueden utilizarse como fuente de información para mejorar la salud de la ubre.
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Staphylococcus aureus: Asociación de genes de virulencia, genotipos y presentación clínica
Bovine Staphylococcus aureus: Association of virulence genes, genotypes and clinical outcome
C. Fournier, P. Kuhnert, J. Frey, R. Miserez, M. Kirchhofer, T. Kaufmann, A. Steiner, H.U. Graber
Research in Veterinary Science, 2008. Vol. 85 (3): 439-448
En base a la hipótesis elaborada de que la población de Staphylococcus aureus está constituida por diferentes subtipos que se diferencian en su poder patógeno y contagiosidad, se procedió a analizar cepas de este patógeno aisladas a partir de procesos intramamarios.
De estas cepas se estudió sus patrones genéticos de virulencia y los genotipos mediante la técnica de PCR (se amplificaron los fragmentos 16S y 23S del ARN). Seguidamente, los genotipos se asociaron a los datos epidemiológicos y clínicos procedentes de 26 explotaciones.
Los resultados mostraron una asociación importante entre los genotipos y los patrones genéticos para la virulencia, así como entre las características epidemiológicas y patogénicas del S. aureus. Concretamente, el genotipo B se encontraba relacionado con un elevado poder de contagio y mayor patogenicidad, mientras los otros (C, OG) se observaron ocasionalmente afectando a un solo individuo.
Los autores consideran de gran interés clínico los resultados obtenidos, y creen necesario avanzar en este sentido lo que supondría tipificar las diferentes cepas de S. aureus asociadas a infecciones intramamarias.
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Estafilococos coagulasa negativos aislados a partir de localizaciones extramamarias e infecciones intramamarias en un rebaño bovino lechero
Coagulase-negative staphylococci isolated from bovine extramammary sites and intramammary infections in a single dairy herd
S.Taponen, J. Björkroth and S. Pyörälä
Journal of Dairy Research, 2008. Vol. 75: 422-429
El objetivo de este trabajo de investigación fue conocer las diferentes poblaciones bacterianas de estafilococos coagulasa negativos (ECN) implicadas en los procesos mamíticos y establecer su procedencia.
Para ello, se tomaron muestras con un bastoncillo de la piel del periné, de la ubre, de las puntas y de los canales de los pezones de vacas de un rebaño lechero y se compararon con cepas de ECN aisladas a partir de mamitis bovinas. Adicionalmente, se tomaron muestras de las manos de los operarios de la explotación y de las pezoneras para detectar estos patógenos. Paralelamente, cepas de ECN procedentes de muestras de leche tomadas en el mismo periodo de tiempo, se identificaron mediante tiras API y técnicas moleculares (ribotipado).
En base al fenotipo se identificó el 84% de las cepas aisladas a partir de las mamitis y el 57% de cepas procedentes del entorno de la ubre con un nivel de probabilidad superior al 90%. Los patrones de ribotipado permitieron establecer 24 grupos, 15 de los cuales incluían una cepa tipo de ECN. Si los grupos obtenidos en el ribotipado contenían cepas de origen extramamario e intramamario (mamitis) eran sometidos a electroforesis en gel con campo pulsátil.
Las especies de ECN predominantes en las mamitis fueron S. chromogenes y S. simulans. El fenotipado no permitió identificar la mitad de las cepas extramamarias, no obstante, se identificaron por esta técnica los patógenos S. equorum y S. sciuri y mediante la técnica de ribotipado S. succinus y S. xylosus, predominantes entre las cepas aisladas fuera de la glándula mamaria.
La especie más frecuente en leche fue S. chromogenes que también estaba presente en numerosas muestras extramamarias, y 5 de los 10 pulsotipos obtenidos en la electroforesis incluían cepas extra e intramamarias, indicativo de que las cepas que se encuentran en la piel de la ubre son muy similares. La segunda especie más frecuente en las muestras de mamitis fue S. simulans, aislada exclusivamente en tres muestras extramamarias, lo que significa que esta bacteria podría asociarse de forma específica a las mamitis.
De los resultados obtenidos se concluye que el origen de las mamitis por ECN podría variar en función de las especies que la causaron.
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Consecuencias de la infusión intramamaria de una combinación antibiótica en periodo de transición en las infecciones mamarias y en los recuentos de células somáticas
Influence of an intramammary infusión at drying-off of combined penethamate hyodride, benethamine penicillin, and framycetin sulfate on intramammary infections and somatic cell counts in dairy sheep
B. Linage and C. Gonzalo
J. Dairy Sci. 91: 3459-3466
El trabajo que se describe a continuación comprobó los efectos de una infusión intramamaria, con una combinación antibiótica que contenía 100 mg de penetamato iohidrato, 280 mg de benetamina penicilina y 100 mg de framicetina sulfato, en la dinámica de la infección intramamaria en un grupo de 229 ovejas de la raza Assaf pertenecientes a dos rebaños con prevalencias alta y media de infección intramamaria.
Para llevar a cabo el estudio, las ovejas se distribuyeron en dos grupos, uno con animales tratados con la combinación antibiótica (GT) y el otro con animales no tratados (grupo control, GC). Tras la infusión mamaria se tomaron muestras en los 5 últimos días de secado y de nuevo, en los 5 primeros días posparto.
En las ovejas tratadas (GT) se observó una mejor respuesta frente a la infección: el 81,7% se curó con respecto al 13,3% en el GC; mostraron mejores índices con respecto a las tasas de infección persistente (12,8% frente a 70,4%), reinfección (5,5% frente a 16,3) y nuevas infecciones (7,9% frente a 22,8); y la prevalencia de la infección intramamaria descendió de 48,9% en el secado al 13,0% en el momento del parto, mientras apenas varió en el grupo control.
En cuanto a las poblaciones bacterianas más afectadas por el tratamiento, resultaron ser Staphylococcus y Streptococcus que redujeron su presencia del 41,3 a 9,9% y del 5,8 a 1,8%, respectivamente. El logaritmo de los recuentos de células somáticas también se redujo significativamente de 5,68 (en el secado) a 5,33; mientras apenas se detectó variación en el grupo control. Cabe destacar, que este descenso fue más marcado en el grupo de animales con una mayor prevalencia de infección.
A partir de los resultados obtenidos, los autores concluyen que la aplicación de la infusión intramamaria como terapia de secado redujo considerablemente la infección intramamaria y los recuentos en las ovejas durante el secado, consecuencia de las mayores tasas de curación en el grupo de animales tratados, y de que la reinfección o las nuevas infecciones se redujeron en dicho grupo.
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